Silva, A. L. L et al. 4
J. Biotec. Biodivers. v. 1, N.1: pp. 1-5, Nov. 2010
y = 0.7214x - 6.6586x + 105.36
R = 0.92
80
90
100
50 75 100 125 150
Kanamycin (mg.L )
Survival (%)
A
y = 4.8643x - 41.776x + 99.8
R = 0.96
0
10
20
30
40
50
60
70
50 75 100 125 150
Kanamycin (mg.L )
Survival (%)
B
y = 0.836x - 12.84x + 53
R = 0.98
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50 75 100 125 150
Kanamycin (mg.L )
Survival (%)
C
Figure 3- Percentage of survival of shoot tip of Eucalyptus saligna cultured at different levels of kanamycin after (A) 84, (B) 112 and (C) 140 days of in vitro culture.
During fourth month survival rate have varied from 67 to 14%, and during fifth month this rate varied from 42 to 14% (Figure 3B-C). At the next month, all explants are died. Different results were found in E. camaldulensis , which 9 mg.L kanamycin inhibit shoot regeneration (Mullins et
al., 1997). E. saligna plantlets cultivated at 100 mg.L kanamycin showed 3.9% survival rate after 60 days of culture (Andrade, 2001).
CONCLUSIONS
Cotyledons can be selected more quickly than shoot tip, moreover needs lower kanamycin levels than shoot tip, what results more speed and economy during genetic transformation process. It is probable that levels lower than 12.5 mg.L kanamycin must be ideal for the cotyledons selection and 50 mg.L kanamycin for shoot tip.
RESUMO
Um agente seletivo eficiente é determinante no processo de obtenção de plantas transgênicas; o agente seletivo mais usado para transformação genética de eucalipto é a canamicina. O objetivo desse trabalho foi determinar as concentrações ideias de canamicina em
cotilédones e em ápices caulinares de Eucalyptus saligna para uso como agente seletivo para transformação genética. Dois experimentos foram conduzidos, um para testar os efeitos da canamicina nos cotilédones e o outro para testar os efeitos da canamicina nos ápices caulinares. No experimento com cotilédones foram testadas as seguintes concentrações: 0, 12.5, 25, 37.5 and 50 mg.L de canamicina em meio para formação de calos e no experimento de ápices caulinares foram testadas as concentrações de 50, 75, 100, 125 e 150 mg.L de canamicina em meio de
multiplicação. Cotilédones podem ser selecionados mais rapidamente do que os ápices caulinares, além disso necessitam de menores concentrações de
canamicina, o que resultaria maior velocidade e economia durante o processo de transformação genética. É provável que níveis inferiores que 12,5 mg.L de canamicina sejam ideais para a seleção de cotilédones. Para a seleção de ápices caulinares podem ser usados 50 mg.L de canamicina.
Palavras-chave: Eucalipto, espécie lenhosa,
transformação genética
REFERENCES
Alfenas, A. C.; Zauza, E. A. V.; Mafia, R. G.; Assis, T. F. (2004), Clonagem e doenças do Eucalipto. Viçosa: UFV, Imprensa Universitária. p. 442.
Andrade, A. Avaliação de parâmetros que influenciam a transformação genética do Eucalyptus grandis via Agrobacterium . Dissertação (Mestrado em Agronomia) - Universidade de São Paulo, 2001.